現(xiàn)在，PCR試劑盒常用于各種檢測。其中di檢出限是PCR試劑盒一個(gè)重要的參數(shù)。PCRdi檢出限就是所能檢測到的靶標(biāo)的di值。di檢出限的確定應(yīng)通過定量標(biāo)準(zhǔn)品來完成。定量標(biāo)準(zhǔn)品一般是經(jīng)過嚴(yán)格標(biāo)定拷貝數(shù)的陽性DNA，梯度稀釋后進(jìn)行一系列的檢測，每個(gè)梯度做8個(gè)復(fù)孔，終確定條帶能否觀測到或確定Ct值。

 示例. PCR定量標(biāo)準(zhǔn)品（支原體）（Minerva Biolabs）

接著可用Reed-Muench公式計(jì)算方法的檢測限（LOD50），lgLOD50=距離比例×稀釋對(duì)數(shù)質(zhì)檢的差+高于50%檢出率的稀釋度的對(duì)數(shù)。距離比例=（高于50%檢出率的百分?jǐn)?shù)-50%）/（高于50%檢出率的百分?jǐn)?shù)-低于50%檢出率的百分?jǐn)?shù)）。也可使用Excel軟件在回歸分析中，自動(dòng)計(jì)算LOD值（Data>Data Analysis>Regression，選中X，Y值）

PCRdi檢出限相當(dāng)于方法的靈敏度，它與DNA模板的質(zhì)量（包括是否有雜質(zhì)）、整個(gè)PCR反應(yīng)體系的性能優(yōu)化（包括反應(yīng)緩沖液、酶的功能、引物序列、引物濃度）、PCR程序條件的設(shè)定都有關(guān)系。有人采用巢式PCR，的確使得方法的靈敏度更高，但同時(shí)也增加了反應(yīng)的復(fù)雜性和反應(yīng)時(shí)間。

總之，PCR具有足夠低的檢測限，才能保證不會(huì)發(fā)生漏檢。因此，在方法學(xué)意義上，di檢測限應(yīng)受到足夠的重視。

參考文獻(xiàn)：

1. Armbruster, D.A., Pry T. Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation. Clin. Biochem. Rev. 29, Suppl 1 (2008).
2. Ripp, J., Analytical Detection Limit Guidance & Laboratory Guide for Determining Method Detection Limits, Wisconsin Department of Natural Resources, Laboratory Certification Program, 1996. 
3. Shrivastava, A., Gupta, V. Methods for the determination of limit of detection and limit of quantitation of the analytical methods. Chronicles Young Sci. 2, 1 (2011). doi:10.4103/2229-5186.79345.
4. Desimoni, E., Brunetti, B. About Estimating the Limit of Detection by the Signal to Noise Approach. Pharm. Anal. Acta. 6, 4 (2015). doi:10.4172/2153-2435.1000355.

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