支原體qPCR檢測，即支原體熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR），是一種高靈敏度、高特異性的分子生物學(xué)檢測技術(shù)，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)物的支原體污染檢測。本文將從技術(shù)原理、優(yōu)勢和應(yīng)用三個(gè)方面，對支原體qPCR檢測在細(xì)胞培養(yǎng)物中的應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)介紹。

一、技術(shù)原理

支原體qPCR檢測的原理基于PCR技術(shù)的擴(kuò)增特性和熒光探針的實(shí)時(shí)檢測。具體來說，該技術(shù)通過設(shè)計(jì)特定的引物和探針，以支原體基因組中的保守序列（如16S rRNA編碼區(qū)）為目標(biāo)，進(jìn)行DNA的特異性擴(kuò)增。在PCR反應(yīng)過程中，熒光探針與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號，熒光信號的強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量成正比。通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的變化，可以實(shí)現(xiàn)對支原體DNA的定量檢測。

二、優(yōu)勢

高靈敏度：支原體qPCR檢測能夠穩(wěn)定檢測到低至10拷貝的支原體DNA，比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法更加靈敏。

高特異性：該技術(shù)涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種，與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)，保證了檢測的準(zhǔn)確性。

快速簡便：與傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法相比，支原體qPCR檢測的反應(yīng)時(shí)間大大縮短，通常在2-3小時(shí)內(nèi)即可得出結(jié)果，提高了檢測效率。

穩(wěn)定可靠：通過內(nèi)參擴(kuò)增效率的檢測，可以有效避免假陰性結(jié)果，提高了檢測的可靠性。

定量檢測：通過CT值判斷，可以進(jìn)行定量檢測，為科研人員提供更多的有用信息。

三、應(yīng)用

支原體是實(shí)驗(yàn)室中常見的污染細(xì)胞的原核生物，據(jù)統(tǒng)計(jì)約有15%-35%的細(xì)胞被支原體污染。支原體污染會改變宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，甚至影響科研效率。因此，對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行支原體qPCR檢測具有重要意義。

在實(shí)際應(yīng)用中，科研人員可以通過支原體qPCR檢測對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行定期檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理支原體污染。同時(shí)，該技術(shù)還可以用于支原體感染的早期診斷和治療，為臨床診斷和治療提供有力支持。

總之，支原體qPCR檢測以其高靈敏度、高特異性、快速簡便、穩(wěn)定可靠和定量檢測的優(yōu)勢，在細(xì)胞培養(yǎng)物的支原體污染檢測中發(fā)揮著重要作用。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相信該技術(shù)將在未來的科研和臨床應(yīng)用中發(fā)揮更加重要的作用。